货号:Y-113-1, 包装:1ML,价格:300元
货号:Y-113-2, 包装:5×1ML,价格:1200元
产品别名:SYBR Green qPCR Master Mix
英文名称:2×qPCR Mix (SYBR Green)
英文别名:Realtime PCR Kit,RT-PCR Kit
2×qPCR Mix(SYBR Green)
产品简介
本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行qPCR的专用试剂,可对目的基因片段进行定量检测。产品采用了抗体修饰的新型热启动Taq DNAPolymerase,配合创新优化的最适Buffer,可以在所有Real-Time PCR仪平台进行高特异性、高灵敏度的qPCR检测,定量结果准确、重复性好、可信度高。ROX Reference Dye I/II用于校正仪器孔间误差,可根据实验所用仪器选择添加。
产品组成
组分 | 100 rxns/20μlreaction | 500 rxns/20μlreaction |
2×qPCR Mix (SYBR Green) | 1.0 mL | 5×1.0 mL |
50×ROXReferenceDye I | 40 µL | 200 µL |
50×ROXReferenceDye II | 40 µL | 200 µL |
实验流程
1. 在qPCR管中配制如下反应体系
2×qPCR Mix (SYBR Green)a | 10.0 µl |
Primer1 (10 µM)b | 0.8 µl |
Primer2 (10 µM)b | 0.8 µl |
Template DNA/cDNAc | x µl |
50× ROX Reference Dye I/IId | 0.4 µl |
ddH2O | Up to 20.0 µl |
a 使用前请确认完全溶解,并充分混匀。
b通常反应体系中引物终浓度为0.4 μM。当反应性能较差时,可以在终浓度0.1 - 1.0 μM范围内调整优化。
c模板加入量因待测基因拷贝数差异而不同,可进行模板梯度稀释预试验得到最佳用量。模板用量建议不超过100 ng。推荐将模板稀释后加入反应体系中,以提高实验的重复性。如模板为未稀释cDNA原液,加入体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。
d 根据所使用Real-TimePCR仪机型确定ROX Reference Dye使用情况,如下所示:
ROX Reference Dye I: Applied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast; StepOne, StepOnePlus.
ROX Reference Dye II: Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7; Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P.
无需添加ROX Reference Dye: Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;
Cepheid SmartCycler; Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR;
Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;
Roche Applied Science LightCycler 480; Thermo Scientific PikoReal Cycler.
2. 按照如下程序进行qPCR反应
阶段 | 温度 | 时间 | 循环数 |
预变性a | 95℃ | 30 sec | 1 cycle |
循环反应 | 95℃ | 10 sec | 40 cycles 60℃采集荧光信号 |
60℃ | 30 sec | ||
溶解曲线b |
a 该预变性条件适合绝大多数扩增反应;若模板结构复杂,可延长时间至3min以提高预变性效果。
b 使用仪器默认融解曲线采集程序。
保存条件
-25 ~ -15℃避光保存;
2×qPCR Mix解冻后可于2 ~ 8℃避光条件下存放3个月,避免反复冻融。
技术支持
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