产品名称：染料法荧光定量PCR试剂盒(含ROX)

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产品别名：SYBR Green qPCR Master Mix

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英文名称：2×qPCR Mix （SYBR Green）

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英文别名：Realtime PCR Kit，RT-PCR Kit

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储存条件：-20°C

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应用:科研

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2×qPCR Mix（SYBR Green）

 

产品简介

本产品是采用SYBR Green I嵌合荧光法进行qPCR的专用试剂，可对目的基因片段进行定量检测。产品采用了抗体修饰的新型热启动Taq DNAPolymerase，配合创新优化的最适Buffer，可以在所有Real-Time PCR仪平台进行高特异性、高灵敏度的qPCR检测，定量结果准确、重复性好、可信度高。ROX Reference Dye I/II用于校正仪器孔间误差，可根据实验所用仪器选择添加。

 

产品组成

组分	100 rxns/20μlreaction	500 rxns/20μlreaction
2×qPCR Mix (SYBR Green)	1.0 mL	5×1.0 mL
50×ROXReferenceDye I	40 µL	200 µL
50×ROXReferenceDye II	40 µL	200 µL

 

实验流程

1. 在qPCR管中配制如下反应体系

2×qPCR Mix (SYBR Green)a	10.0 µl
Primer1 (10 µM)b	0.8 µl
Primer2 (10 µM)b	0.8 µl
Template DNA/cDNAc	x µl
50× ROX Reference Dye I/IId	0.4 µl
ddH2O	Up to 20.0 µl

 

a 使用前请确认完全溶解，并充分混匀。

b通常反应体系中引物终浓度为0.4 μM。当反应性能较差时，可以在终浓度0.1 - 1.0 μM范围内调整优化。

c模板加入量因待测基因拷贝数差异而不同，可进行模板梯度稀释预试验得到最佳用量。模板用量建议不超过100 ng。推荐将模板稀释后加入反应体系中，以提高实验的重复性。如模板为未稀释cDNA原液，加入体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。

d 根据所使用Real-TimePCR仪机型确定ROX Reference Dye使用情况，如下所示：

  ROX Reference Dye I: Applied Biosystems 5700, 7000, 7300, 7700, 7900, 7900HT, 7900HT Fast; StepOne, StepOnePlus.

  ROX Reference Dye II: Applied Biosystems 7500, 7500 Fast, ViiA7; Stratagene MX4000, MX3005P, MX3000P.

  无需添加ROX Reference Dye: Bio-Rad CFX96, CFX384, iCycler iQ, iQ5, MyiQ, MiniOpticon, Opticon, Opticon 2, Chromo4;

Cepheid SmartCycler; Eppendorf Mastercycler ep realplex, realplex 2 s; Illumina Eco qPCR;

Qiagen/Corbett Rotor-Gene Q, Rotor-Gene 3000, Rotor-Gene 6000;

Roche Applied Science LightCycler 480; Thermo Scientific PikoReal Cycler.

 

 

 

 

 

 

 

 

2. 按照如下程序进行qPCR反应

阶段	温度	时间	循环数
预变性a	95℃	30 sec	1 cycle
循环反应	95℃	10 sec	40 cycles 60℃采集荧光信号
	60℃	30 sec
溶解曲线b

 

a 该预变性条件适合绝大多数扩增反应；若模板结构复杂，可延长时间至3min以提高预变性效果。

b 使用仪器默认融解曲线采集程序。

 

保存条件

-25 ~ -15℃避光保存；

2×qPCR Mix解冻后可于2 ~ 8℃避光条件下存放3个月，避免反复冻融。

 

技术支持

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