货号：10417-1， 包装：50-500T，价格：600元
货号：10417-2， 包装：200-2000T，价格：2000元
英文名称：Click EdU Cell Proliferation Kit with Dye
Click EdU细胞增殖检测试剂盒(染料可以定制)
产品组成：
产品编号 | 产品名称 | 包装 |
10417-A | EdU (10mM) | 200μL |
10417-B | 特异性荧光染料 | 55μL |
10417-C | Click Reaction Buffer | 30mL |
10417-D | CuSO4 | 1.1mL |
10417-E | Click Acceleration Reagent | 1管 |
10417-F | PI (1000X) | 50μL |
保存条件：
-20℃保存，一年有效。特异性荧光染料和PI须避光保存
产品简介：
Click EdU细胞增殖检测试剂盒(Click EdU Cell Proliferation Kit with Dye)，是一种基于DNA合成过程中胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidine)类似物EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)的掺入，并通过随后的点击反应(Click reaction)使EdU被Dye所标记，从而实现简单、快速、高灵敏地检测细胞增殖的试剂盒。
本试剂盒可以检测到细胞或组织样品中单个的增殖细胞，同时也可以对细胞或组织样品总体的细胞增殖情况进行定量检测。本试剂盒可以检测培养的细胞或组织样品，也可以检测组织切片。
经本试剂盒处理后，增殖的细胞在荧光显微镜下呈现非常明亮的蓝色荧光，可以用于荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪（须配有DAPI检测通道）或荧光酶标仪检测，也可以用于高内涵筛选(High-Content Screening, HCS)。流式细胞仪或荧光酶标仪检测仅适用于细胞样品，不适用于组织切片。
细胞增殖能力的检测是评估细胞活性、基因毒性和抗肿瘤药物效果等的基本方法。公认的最精确的检测细胞增殖的方法是直接检测细胞中DNA的合成。最初广泛使用的通过检测DNA合成来检测细胞增殖的方法是放射性标记核苷掺入法，如氚标记胸腺嘧啶脱氧核苷([3H]thymidine)掺入法。但该方法由于有放射性污染并且很难实现单细胞检测而受到很大的限制，随后逐渐被基于抗体检测的BrdU(bromo-deoxyuridine)法所替代。BrdU法步骤繁多，且需要使用BrdU抗体，影响因素较多，稳定性比较差。并且由于BrdU法需要使用抗体，有时会和其它目的蛋白基于抗体的检测相互产生干扰。EdU法基于EdU掺入和后续的点击反应，无需使用抗体、操作便捷、检测灵敏度高，是一种在BrdU法基础上升级换代的新方法，将会逐步取代BrdU法。
MTT法、WST-1法、CCK-8法和CellTiter-Lumi™化学发光法都是基于细胞活性的细胞增殖检测方法，能检测到细胞的总体增殖效果，但无法检测到单个的增殖细胞。这几种方法尽管都不是检测DNA合成的，但被广泛用于替代[3H]thymidine掺入法。CFDA SE法，基于细胞荧光示踪的原理能检测到单个的增殖细胞，但由于每增殖一次荧光减弱一半，在荧光显微镜下较难区分荧光减弱一半的细胞，检测灵敏度不是很高，通常仅适用于流式细胞仪检测。在进行科学研究时，上述这些基于细胞活性或CFDA SE的方法可以作为EdU法的补充性检测方法。
EdU(5-ethynyl-2' -deoxyuridine)，中文名为5-乙炔基-2' -脱氧尿苷，是一种新型胸苷(胸腺嘧啶脱氧核苷，thymidine)类似物，EdU可以在DNA合成过程中替代胸苷掺入到新合成的DNA中。另一方面，EdU上的乙炔基能与EdU特异性反应探针通过一价铜离子的催化发生共价反应，形成稳定的三唑环，该反应非常迅速，被称作点击反应(Click reaction)，通过点击反应，新合成的DNA会被相应的荧光探针所标记，从而可以使用适当的荧光检测设备检测到增殖的细胞。
产品特点：
本试剂盒反应简单、检测灵敏度高。
本试剂盒基于简单高效的点击反应，无需DNA变性，只需少量的小分子EdU特异性反应探针即可非常有效地标记出掺入的EdU，并且可以检测到单个细胞的增殖情况。
本试剂盒使用便捷、兼容性好。
本试剂盒只需常用的多聚甲醛固定和Triton X-100穿透，就可以使EdU特异性反应探针有效进入细胞并发生点击反应，不会影响细胞形态，不会影响基于抗体的免疫荧光和免疫组化检测，也不会影响DNA的荧光染色(如PI染色检测细胞周期)。而BrdU法为了使大分子的BrdU抗体进入细胞并与DNA上的BrdU结合，需要对双链DNA进行变性处理(如酸变性、热变性或者DNase消化等)，这种变性可能会影响细胞形态，影响后续的免疫荧光和免疫组化检测、DNA的荧光染色等
本试剂盒检测快速，定性定量检测都非常便捷。
相对于至少需要4小时的BrdU法，本试剂盒采用的Click EdU法检测新合成的DNA只需1.5-2小时，时间上大大缩短。本试剂盒同时提供了染色细胞核的PI，以方便染色观察所有的细胞核。可以使用荧光显微镜或流式细胞仪等进行定性和定量检测。本试剂盒小包装，如果用于培养的细胞(6孔板)的检测，可以检测50个样品，每个样品的反应体系为500μl的Click反应液；如果用于96孔板检测，可以检测500个样品，每个样品的检测体系为50μl的Click反应液；如果用于12孔、24孔、48孔或384孔板样品的检测，分别可以检测125、250、350和1250个样品，每个样品推荐的Click反应液用量为200μl、100μl、70μl和20μl。小包装如果用于流式细胞仪检测，可以检测50个样品，每个细胞样品的细胞数量宜为10-100万，每个样品的反应体系为500μl的Click反应液。小包装如果用于冰冻或石蜡切片的检测，可以检测125-250个样品， 每个样品的反应体系为100-200μl的Click反应液。
注意事项：
Click Additive配制成溶液后请注意适当分装。如果溶解后有白色物质析出，请上下颠倒多次，待全部溶解后使用。如果该溶液颜色变成棕色，说明该组分的有效成分已失效，请弃用。
由于本产品需要铜离子催化进行点击反应，请注意如下的兼容性问题及解决方案。本产品完全兼容有机类染料如Alexa Fluor®系列普通染料及fluorescein (FITC)、Allophycocyanin (APC)及APCE-tandems染料；对于Qdot®纳米晶体探针、Horseradish peroxidase (HRP)、R-phycoerythrin (R-PE)和R-PE-tandems染料如Alexa Fluor® 680-R-PE等，需要在点击反应完成后进行反应和检测；本产品会影响GFP、RFP、mCherry等荧光蛋白的荧光，对于荧光类蛋白如Green Fluorescent Protein (GFP)、FlAsH™和ReAsH™类试剂，需要在点击反应前进行反应和检测。由于Phalloidin (鬼笔环肽)不兼容点击反应，推荐使用进行细胞微管的检测。
温馨提示：
本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品，不得存放于普通住宅内。
为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
使用说明：
1. 需要用户自行准备试剂：
1XPBS,固定液，洗涤液，通透液，超纯水；盖玻片等耗材
2. 培养细胞的EdU的标记及固定、洗涤和通透（参考）
a. 在6孔板中培养适当数量的细胞。细胞培养过夜并且恢复到正常状态后，进行所需的药物处理。
b. 配制2X的EdU工作液：推荐的EdU终浓度为10μM (1X)，用细胞培养液1:500稀释EdU (10mM)即可得到2X的EdU工作液(20μM)。
注意：对于A549、HeLa和NIH/3T3等贴壁细胞，推荐EdU的使用终浓度为10μM。但细胞类型、培养液种类、细胞密度、细胞增殖速度等多方面的因素会影响EdU掺入到细胞中的量，因此初次使用时建议对EdU的使用浓度进行一定的摸索。如果之前使用过BrdU进行实验，则可以参考BrdU的终浓度作为EdU的终浓度。
c. 将37ºC预热的2X的EdU工作液(20μM)，等体积加入6孔板中，使6孔板中的EdU终浓度变为1X。更换所有的培养液可能会对细胞的增殖有影响，因此不建议替换所有的培养液。
d. 继续孵育细胞2小时。该孵育时间的长短取决于细胞生长速率，通常宜继续孵育细胞周期10%左右的时间。孵育时间小于45分钟时，建议提高EdU的浓度；孵育时间大于20小时时，建议适当降低EdU的浓度。
e. EdU标记细胞完成后，去除培养液，并加入1mL固定液(4%的多聚甲醛)，室温固定15分钟。
注意：对于流式细胞仪检测，贴壁细胞胰酶消化后用培养液重悬后再固定。
f. 去除固定液，每孔用1mL洗涤液 (1X PBS) 洗涤细胞3次，每次3-5分钟(水平摇床缓慢摇晃)。
g. 去除洗涤液，每孔用1mL通透液(0.3% TritonX-100的PBS)，室温孵育10-15分钟。
h. 去除通透液，每孔用1mL洗涤液洗涤细胞1-2次，每次3-5分钟(水平摇床缓慢摇晃)。
3. EdU检测
a. 配制Click Acceleration Solution：用1.5mL去离子水溶解一管Click Acceleration Reagent，混匀至全部溶解，即为Click Acceleration Solution。配制后可以适当分装，并-20ºC保存。
b. 参考下表配制Click反应液。注意：请严格按照下表中组分顺序和体积配制Click反应液，否则点击反应可能无法有效进行；同时，Click反应液须在配制后15分钟内使用。
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试剂 | 6孔板样品数 | ||||||
1 | 2 | 4 | 5 | 10 | 25 | 100 | |
Click Reaction buffer | 475 µL | 950 µL | 1.9 mL | 2.375 mL | 4.75 mL | 11.875 mL | 47.5 mL |
CuSO4 | 20 µL | 40 µL | 80 µL | 100 µL | 200 µL | 500 µL | 2 mL |
EdU特异性荧光染料 | 1 µL | 2 µL | 4 µL | 5 µL | 10 µL | <span style="font-size: 13px;font-family: 'Times New Roman', serif;color: rgb(102, 102, 102);border: 1px none windowtext;padding: 0;background: white | |