产品名称：酵母样品直扩PCR鉴定试剂盒

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英文名称：Yeast Sample Direct Expansion PCR Identification Kit

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储存条件：-20°C

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应用:科研

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酵母样品直扩PCR试剂盒

【产品概述】

本试剂盒采用独特的裂解液，所得产物不受细胞释放PCR抑制剂影响可以直接用于PCR扩增，可用于酵母等微生物基因扩增分析。

【产品组分】

组分	PD-001 100 rxns （20 μl/rxn）	保存条件
酵母样品裂解液	10 ml	常温
2x 直扩PCRMix	1 mL	-20℃

【使用方法】

1. 裂解：用枪头挑取适量样品（肉眼可见的明显菌体团块），加入到70 μl裂解液中，95℃孵育30分钟。

2. 离心：12000 rpm，1 min。

3. 基因扩增：取0.5-1 μl上清液用于PCR反应（适用于20 μl反应体系，其他反应体系按比例增加上清液使用量）。

【PCR 反应鉴定】

一、PCR 反应体系

组分	推荐用量	推荐终浓度
2x 直扩PCR Mix	10μl	1X
Forward Primer(10μM)	0.5μl	0.2-0.4μM
Reverse Primer (10μM)	0.5μl	0.2-0.4μM
裂解产物	1μl
ddH2O	补足至20μl

注：各组分使用前应充分混匀。

二、PCR 反应条件

步骤	温度	时间	循环数
预变性	98℃	3min	1 cycle
变性	98℃	15sec	35 cycles
退火	56℃	15sec
延伸	72℃	15sec/Kb
终延伸	72℃	5min	1 cycle

*退火温度：请参考引物的理论Tm值，退火温度可设置低于引物理论值2-5 ℃，或通过梯度PCR确定最佳温度。

【注意事项】

1. 模板使用量：建议按1-10%总体系量取用模板，20 μl体系建议采用1 μl上清液作为模板。

2. 引物终浓度：0.2-0.4 μM可以得到较好结果。反应性能较差时，可在0.1-0.5 μM范围内调整引物浓度。

3. 反应体系：推荐使用20 μl，也可根据使用习惯调整体系体积大小。

4. 体系配制：配制好PCR反应体系，置于涡旋仪上涡旋混匀，瞬时离心将反应液集于管底。

【琼脂糖凝胶电泳】

PCR产物可直接进行琼脂糖凝胶电泳（无需加入Loading Buffer）。

【对照反应】

在PCR结果分析时，不管是阳性结果或阴性结果，如果没有对照反应，都不能确定结果是否可靠。为了便于后续实验结果的分析，建议在进行PCR时，设置阳性和阴性PCR对照反应以便于排除假阳性或假阴性的干扰。

注意：本产品仅供科学研究使用，不能用于人、动物的医疗或诊断程序，不能使用本产品作为食品、化妆品或家庭用品等。