货号：10452-1， 包装：100T，价格：780元
英文名称：RNAzol+PLG+CFS---套装
RNAzol(总RNA提取试剂）
产品简介：
本品RNAzol可以从动物组织、植物材料、各种微生物、培养细胞等中提取 Total RNA。样品在 RNAzol 中能够充分被裂解，在加入氯仿离心后，溶液会形成上清层、中间层和有机层（鲜红色下层，含有蛋白质、 多糖、脂肪酸、细胞碎片和少量 DNA），RNA 分布在上清层中，收集上清层，注意不要收集中间层，经 异丙醇沉淀便可以回收得到 Total RNA。使用 RNAzol，Total RNA 的提取过程可在 1 小时内完成。 提取的 Total RNA 纯度高，很少含蛋白质及基因组 DNA，可以直接用于 Northern 杂交、mRNA 纯化、 体外翻译、RT-PCR等各种分子生物学实验。如果用于 RT-PCR 实验，即使有少量的基因组 DNA 也会影响实验结果，因此，实验前应使用 DNase I (RNase-free)进行处理。
RNA提取实验前的准备：
1--氯仿（CHCl3）或氯仿替代物（CFS），异丙醇，75%乙醇（RNase-free），DNase/RNase-Free去离子水。2--尽量使用一次性塑料器皿。使用高温高压灭菌后的离心管或用于微量移液器的枪头。若使用玻璃器皿等，应进行160℃干热灭菌2h。不能进行干热灭菌的器皿，需用0.1% DEPC(焦碳酸二乙酯）水溶液在37℃下处理12h，然后在高温高压灭菌以除去残留的DEPC。RNA实验用的器具建议专门使用，不要用于其他实验。
3--使用的无菌水须用0.1%的DEPC处理后再进行高温高压灭菌。如果使用的试剂不能高温高压灭菌，请使用高压灭菌后的仪器盛装，无菌过滤后使用。
4--请使用一次性塑料手套和口罩进行所有试剂配置和实验操作，以避免RNase的污染。
实验操作：
样品量 | RNAzol使用量（mL） |
10cm2的贴壁培养细胞 | 1-2 |
5x106-1x107的非贴壁培养细胞 | 1 |
100µL的白细胞 | 2 |
50-100mg的组织样品（易提取RNA） | 1 |
50-100mg的组织样品（不易提取RNA，如肝，脾，骨及软骨等） | 2 |
15-30mg的植物材料（多糖和多酚含量不高的） | 1 |
2-5x107的酵母细胞 | 1 |
1--实验样品的研磨和匀浆。
A,贴壁培养细胞---a，倒出培养液，用1xPBS清洗1次。
b，每10cm2生长的培养细胞中加入1-2mL的RNAzol，轻微晃动，确保使裂解液均匀分布于细胞表面。注意：对于贴壁牢固的培养细胞可用细胞刮刀玻璃细胞。
c，将内含细胞的裂解液转移至离心管中，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。
d，室温（15-30℃）静置5min，然后从核蛋白中分离RNA.
B,悬浮培养细胞---a，将悬浮培养细胞连同培养液一起倒入离心管中，8,000×g 4℃离心 2 分钟，弃上清，注意不要破 坏细胞沉淀。
b，向每 5×106 个细胞中加入 1 mL 的 RNAzol。
c，用移液枪反复吹吸直至裂解液中无明显沉淀。
d，室温（15-30℃）静置 5 分钟，然后从核蛋白中分离 RNA。
C,动物组织，植物材料样品
a，将超低温冻结的RNA提取样品称量后迅速转移至用液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，期间不断加入液氮，直至研磨成粉末状（如果没有研磨彻底会影响RNA的收率和质量），可以向研钵中加入与样品匀浆量匹配的适量的RNAzol 。对于新鲜的组织样品，立即加入RNAzol，充分匀浆。
b，将匀浆液转移至离心管中，室温(15-30℃）静置5min。
c，12000×g 4℃离心5min。
d，小心吸取上清液，移入新的离心管中（切勿吸取沉淀）。
2-Total RNA的提取
Proandy公司推出了一款独特的产品—Phase Lock Gel(PLG)，只需将酚氯仿和样品的混合物加入预装有PLG的管子里，在离心力的作用下，由于密度不同，在有机相和水相之间形成致密的固相，成为保护核酸免受有机相污染的有效屏障。
注：Phase Lock Gel(PLG) 只适用于和RNAzol搭配做RNA提取，并不适用于常规组织基因DNA提取。PLG必须保存在室温，不可冷冻。
a，向匀浆裂解液中加入氯仿或氯仿替代物（CFS）（RNAzol的1/5体积量），盖紧离心管盖，混合至溶液乳化呈乳白色。室温静置5min。
b，将a步骤中的混合液转移至预装有PLG的管子里。
c，12000×g 4℃离心15min，从离心机中小心取出离心管，此时匀浆液分为三层，即：无色的上清液（含RNA）,中间的PLG凝胶,下层是带有颜色的有机相。
d，此时可轻松吸出或倒出全部水相转移至另一新的离心管中。
e，向上清中加入0.5-1倍RNAzol体积的异丙醇，上下颠倒离心管充分混匀后，室温下静置10min 。
f，12000×g 4℃离心10min，一般在离心后，试管底部会出现RNA沉淀。
3-RNA沉淀的清洗：
小心弃去上清，切勿触及沉淀，残留少量异丙醇没有关系，加入与RNAzol等量的75%乙醇，轻轻上下颠倒洗涤离心管管壁，7500×g 4℃离心5min后小心弃去上清，切勿触及沉淀。
4-RNA的溶解。
打开离心管盖，室温干燥沉淀几分钟，沉淀干燥后，加入适量的DNase/RNase-Free去离子水溶解沉淀。注意：不可以离心或加热干燥，否则RNA将会很难溶解。
RNA纯度分析
1. 用琼脂糖凝胶电泳（1%琼脂糖+溴乙锭）分析按以上方法提取获得的 1-2 μg 热变性 total RNA。对于没有降解的 RNA 可能是 2 种 核糖体 RNA（真核细胞：28S 和 18S），条带亮度约为 2:1。但如果核糖体 RNA 条带弥散，可能 RNA 已降解。此外，如果条带大小超过 28S，可能存在基因组 DNA 污染，建议使用 DNase I 处 理。
2. 吸光度分析：用 TE Buffer 稀释 RNA 后测定吸光度，OD260/OD280 比值在 1.7-2.1 为好。 例：RNA 浓度计算方法： RNA 浓度（μg/μl）=（OD260-OD320）×稀释倍数×0.04
保存温度：4℃避光保存。